RT-QPCR EasyTM (uma etapa) - Taqman Cat.No.RT - 02131/02132 de mistura mestra de uma etapa do tempo real RT-PCR

Cat.No.RT - 02131/02132

Mistura mestra de uma etapa do tempo real RT-PCR

RT-PCR EasyTM I (uma etapa)

Cat.No.RT - 02011/02012

Mistura mestra de uma etapa de RT-PCR

Para o uso da pesquisa somente

Loja em -20℃

Introdução de produto

Os produtos de uma etapa da série de Foregene RT-PCR EasyTM realizam que a reação integrada do RNA ao ADN dobro-encalhado, isto é, inverte a transcrição e amplificação do PCR está terminado no mesmo tubo de centrifugador da reação e o mesmo sistema de reação, que simplifica as etapas experimentais, aperfeiçoa o programa experimental, e melhora a eficiência da experiência.

RT-qPCR EasyTM (uma etapa) - Taqman usando a polimerase de ADN de Foregene HotStar Taq, o sistema aperfeiçoado do qPCR de Taqman pode rapidamente e especificamente executar a detecção quantitativa do RT-qPCR do tempo real de moldes do RNA do traço.

Características

- O jogo de uma etapa permite a transcrição reversa e o PCR a ser realizado no mesmo tubo, precisa somente de adicionar o RNA do molde, primeiras demão específicas do PCR e ddH2O RNase-livre.

- A análise quantitativa do tempo real do RNA viral ou do RNA do traço pode ser realizada rapidamente e exatamente.

- O jogo usa uma polimerase original do reagente da transcrição do reverso de Foregene e de ADN de Foregene HotStar Taq combinada com um sistema de reação original para melhorar eficazmente a eficiência da amplificação e a especificidade da reação.

- O sistema de reação aperfeiçoado faz a reação tem uma sensibilidade mais alta da detecção, uma estabilidade térmica mais forte, e a melhor tolerância.

- O RT-qPCR EasyTM (uma etapa) - jogo de Taqman vem com a tintura interna da referência de ROX, que pode ser usada para eliminar o fundo do sinal e os erros do sinal entre poços, que é conveniente para que os utilizadores finais se usem em modelos diferentes de instrumentos quantitativos do PCR

O controle da qualidade de produto

De acordo com o sistema de gerenciamento da qualidade total de FOREGEN (o sistema de gerenciamento da qualidade total de FOREGENE), cada grupo de jogos de RT-PCR EasyTM I (uma etapa) é testado restritamente épocas múltiplas assegurar a qualidade, a confiança e a estabilidade de cada grupo dos jogos.

Kit Contents

Condições do transporte e de armazenamento

condições 1.Transportation

O processo inteiro de transporte de baixa temperatura da caixa de gelo, para assegurar-se de que o jogo esteja em um estado de <4>

2. Condições de armazenamento

RT EasyTM eu sou armazenado em -20°C. armazeno o produto em um refrigerador da temperatura constante em -20°C imediatamente depois do recibo. Se as condições de armazenamento são apropriadas, o produto não degradará nenhum desempenho durante o período de uma validez de 1 ano.

Informação componente do jogo

Mistura de 2× RT-PCR EasyTM: Reverso Transcriptase de Foregene, polimerase de ADN do inibidor do RNase, do Foregene HotStar Taq, dNTPs, Mg2+, amortecedor da reação, optimizer e estabilizador, etc.

Precauções: (Leia por favor as precauções com cuidado antes de usar o jogo)

Para moldes, recomenda-se usar o RNA extraído das amostras frescas ou armazenado em -80℃ (o RNA deve evitar a congelação repetida e thawing).

A fim evitar a contaminação do RNase, a operação da experiência deve ser realizada no espaço RNase-livre; as pontas da pipeta e de centrifugador do PCR os tubos usados devem ser RNase-livres; e as luvas descartáveis e as máscaras devem ser vestidas. Antes de usar, põe a mistura de 2×RT-PCR EasyTM sobre o gelo completamente ao derretimento, ao súbito e à mistura bem antes de usar; a preparação do sistema deve ser operada em um banho de gelo para melhorar o desempenho do jogo e a especificidade da amplificação do PCR.

Concentração do RNA do molde

RT-PCR EasyTM I (uma etapa): (sistema)/20μl do RNA do total 0.1pg-1μg

Kit Application

- Este jogo é usado para a detecção rápida de alto-cópia e de genes da baixo-cópia.

- É especialmente apropriado para a detecção rápida de moldes do RNA com estrutura secundária satisfeita ou complexa alta do GC.

O controle da qualidade de produto

De acordo com o sistema de gerenciamento da qualidade total de FOREGEN (o sistema de gerenciamento da qualidade total de FOREGENE), cada grupo de jogos de RT-PCR EasyTM I (uma etapa) é testado restritamente épocas múltiplas assegurar a qualidade, a confiança e a estabilidade de cada grupo dos jogos.

Guia da operação

: Preparação dos materiais e dos reagentes

1. Prepare o molde preparado do RNA (se recomenda usar jogos da série do jogo do isolamento do RNA do total de Foregene para extrair e refinar o RNA), as primeiras demão específicas (10μM) e materiais de consumo e instrumentos relacionados.

Nota: Assegure por favor a integridade do RNA e tente-a usar o RNA extraído das amostras frescas.

2. A mistura do lugar 2× RT-PCR EasyTM e ddH2O RNase-livres em um banho de gelo para deixá-lo derreter naturalmente, e passam rapidamente a parede do tubo para misturar bem para uso posterior.

B: Preparação do sistema de RT-PCR

A mistura de 2×RT-PCR EasyTM é conveniente e rápida de usar-se, evitando a poluição durante a operação e os erros experimentais causados por preparações múltiplas do sistema de reação na maior medida do possível. Ao usar-se, somente a metade do volume do sistema de reação (por exemplo, se o sistema de reação é 20μl, solução da mistura da tomada 10μl 2×RT-PCR EasyTM), adiciona uma quantidade apropriada de molde do RNA e de primeiras demão específicas, e adiciona ddH2O RNase-livre para compor o volume. Consulte para apresentar abaixo 1 para a preparação específica do sistema de reação de RT-PCR.

Formulário 1: Preparação do sistema de RT-PCR

1*: Geralmente a concentração final de primeira demão é 0.2-0.25μM para obter melhores resultados. Quando o desempenho da reação é pobre, a concentração da primeira demão pode ser ajustada dentro da escala de 0.1-0.5μM.

Nota: A primeira demão dianteira e a primeira demão reversa são as primeiras demão específicas para o gene do alvo; o sistema 50μl, refere por favor o sistema 20μl para ajustar proporcionalmente a dosagem do reagente.

C: Ajuste do programa da reação de RT-PCR

• Após ter preparado o sistema de RT-PCR com referência à tabela acima, mistura delicadamente (você pode usar a ponta da pipeta para fundir delicadamente; você pode igualmente misturar em um vortexer e em um centrifugador momentaneamente para recolher o líquido dispersado na parede do tubo ou no tampão do tubo, e em um lugar na caixa de gelo para uso posterior).

2. Refira os ajustes do programa da reação de RT-PCR (tabela 2) para ajustar a temperatura e o tempo da reação.

Nota: A fim assegurar a atividade da mistura de 2×RT-PCR EasyTM e melhorar sua eficiência da amplificação, é o melhor preparar o sistema de reação de RT-PCR após ter ajustado o programa do instrumento do PCR, de modo que o programa da reação possa ser incorporado imediatamente depois que o sistema é preparado.

Formulário 2: Ajuste do sistema de reação de RT-PCR

Nota: O procedimento acima é para a referência somente. As condições reais da reação variam segundo as condições estruturais do molde, das primeiras demão, etc. Para moldes do RNA com estruturas secundárias complexas, a temperatura da reação para a primeira etapa da transcrição reversa é recomendada ser 50°C. Na operação específica, é necessário projetar as condições ótimas da reação, incluindo a temperatura de recozimento, o tempo da extensão, etc. de acordo com as condições específicas do tamanho do fragmento do alvo, a sequência baixa do fragmento amplificado, e o índice do GC e o comprimento da primeira demão.
Diagrama da operação de RT-PCR

Reverso Transcriptase de Foregene

O transcriptase do reverso de Foregene pode fornecer a reação reversa altamente eficiente e específica da transcrição. O transcriptase reverso exibe a afinidade alta e ainda mantém a boa atividade reversa da transcrição em uma temperatura da reação de 50°C. Pode bem inverter transcreve o RNA com estrutura secundária complexa que outros transcriptases reversos não podem segurar. O reverso Transcriptase de Foregene tem a sensibilidade alta e é aplicável em uma vasta gama das quantidades do RNA (0.1pg≤RNA≤1μg).

Polimerase de ADN de Foregene HotStar Taq

Fornece uma amplificação altamente específica do PCR. Quando a transcrição reversa é em andamento, a polimerase de ADN é completamente ineficaz e não impede a reação reversa da transcrição. Após o programa da reação do PCR, aquecido a 94°C, a polimerase de ADN é ativada e o transcriptase reverso é neutralizado. O processo do quente-início elimina a formação de primeiras demão e de dímero de recozimento não específicos da primeira demão no primeiro ciclo, assegurando a especificidade e a confiança altas da amplificação do PCR.

Cuidado: (Leia por favor as precauções com cuidado antes de usar o jogo)

- Os reagentes devem evitar a congelação repetida e thawing, se não o desempenho dos reagentes diminuirá ou tornar-se-á inválido.

- Recomenda-se usar a extração da amostra ou o RNA fresco do molde armazenada em -80℃ (o RNA deve evitar a congelação repetida e thawing).

- A fim evitar a contaminação do RNase, a operação da experiência deve ser executada no espaço RNase-livre; as pontas da pipeta e os tubos do PCR usados devem ser RNase-livres; e as luvas descartáveis e as máscaras devem ser vestidas.

- Este jogo deve ser usado com primeiras demão específicas para experiências. Selecione por favor as primeiras demão específicas para que o gene seja amplificado de acordo com as necessidades da experiência.

- Antes de usar, põe a mistura de 2× RT-PCR EasyTM sobre o gelo completamente ao derretimento, ao súbito e à mistura bem antes de usar; a preparação do sistema deve ser operada em um banho de gelo para melhorar o desempenho do jogo e a especificidade da amplificação do PCR.

- Banho de gelo

reagentes Auto-preparados

- Molde do RNA

- Primeiras demão específicas do PCR do gene

Segurança

       - Este produto é para o uso da pesquisa científica somente, por favor não o usa na medicina, na medicina clínica, no alimento e nos cosméticos.

       - Roupa apropriada do laboratório do desgaste, luvas, vidros protetores, etc. ao usar produtos químicos.

O controle negativo tem o valor demasiado alto da fluorescência

1. Contaminação do reagente causada durante a operação.

Recomendação: Substitua com os reagentes novos para experiências de RT-PCR.

2. A contaminação ocorreu durante a preparação do sistema de reação do PCR. Recomendação: Tome medidas de defesa necessárias durante a operação, como: luvas vestindo do látex, usando uma ponta da pipeta com um filtro, etc.

3. As primeiras demão são degradadas, e a degradação das primeiras demão conduzirá à amplificação não específica.

Sugestão: Use a eletroforese de SDS-PAGE para detectar se as primeiras demão estão degradadas, e substitua-os com as primeiras demão novas para experiências de RT-PCR.

Repetibilidade pobre de valores quantitativos

1. O instrumento está funcionando mal.

Sugestão: Pode haver uns erros entre cada furo do PCR da máquina do PCR, tendo por resultado a reprodutibilidade pobre durante a gestão ou a detecção da temperatura.

Realize por favor o teste de acordo com as instruções do instrumento correspondente.

2. A pureza da amostra não é boa.

Recomendação: As amostras impuros conduzirão à reprodutibilidade pobre da experiência, que inclui a pureza do molde e das primeiras demão. É o melhor repurify o molde, e as primeiras demão são refinadas melhor por SDS-PAGE.

3. O tempo da preparação e de armazenamento do sistema do PCR é demasiado longo.

Sugestão: Use o sistema de RT-PCR para experiências do PCR imediatamente depois da preparação, e não o deixe durante bastante tiempo; recomenda-se estabelecer o programa do PCR antes da continuação com a preparação do sistema de RT-PCR.

4. As condições da amplificação do PCR não são apropriadas, e a sequência ou a concentração da primeira demão são imprópria.

Sugestão: confirme a exatidão da sequência da primeira demão e a primeira demão não foi degradada; quando o sinal da amplificação não é bom, tente ajustar a temperatura de recozimento e ajustar apropriadamente a concentração da primeira demão.