RT-QPCR EasyTM - verde I Cat.No.RT de SYBR - 02111/02112 uma de mistura mestra do PCR do RT do tempo real da etapa com a tintura da referência de ROX

RT-qPCR EasyTM (uma etapa) - verde I Cat.No.RT de SYBR - 02111/02112 de mistura mestra de uma etapa do tempo real RT-PCR com a tintura da referência de ROX

RT-qPCR EasyTM (uma etapa) - verde I de SYBR

Cat.No.RT - 02111/02112

Mistura mestra de uma etapa do tempo real RT-PCR

Para o uso da pesquisa somente

Loja em -20℃

Introdução de produto

RT-qPCR EasyTM (uma etapa) - verde Iuses de SYBR um sistema original para combinar eficazmente as reações do RT e do PCR do tempo real, que podem rapidamente terminar a detecção quantitativa de genes. O produto tem a tolerância forte, a especificidade alta e a estabilidade. O produto contém a polimerase de ADN original do Foregene HotStar Taq da empresa, que tem as vantagens de uma amplificação mais rápida (2Kb/min), da eficiência alta da amplificação, da capacidade específica forte da amplificação, e da baixa taxa da má combinação comparada com as enzimas ordinárias de Taq. É usado aqui para o tempo real RT-PCR reduzir a amplificação não específica e melhorar a precisão do PCR.

Características

O jogo de uma etapa faz a transcrição reversa e as reações do qPCR dois no mesmo tubo, precisam somente de adicionar o RNA do molde, primeiras demão específicas do PCR e ddH2O RNase-livre.

O jogo pode rapidamente e eficientemente quantitativamente analisar o RNA viral ou o RNA do traço.

O jogo usa uma polimerase original do reagente da transcrição do reverso de Foregene e de ADN de Foregene HotStar Taq combinada com um sistema de reação original para melhorar eficazmente a eficiência da amplificação e a especificidade da reação.

O sistema de reação aperfeiçoado faz a reação tem uma sensibilidade mais alta da detecção, uma estabilidade térmica mais forte, e a melhor tolerância.

O RT-qPCR EasyTM (uma etapa) - jogo do verde I de SYBR vem com a tintura interna da referência de ROX, que pode ser usada para eliminar o fundo do sinal e os erros do sinal entre poços, que é conveniente para que os clientes se usem em modelos diferentes de instrumentos quantitativos do PCR.

Kit Contents

Condições do transporte e de armazenamento

condições 1.Transportation

O processo inteiro de transporte de baixa temperatura da caixa de gelo, para assegurar-se de que o jogo esteja em um estado de <4>

2. Condições de armazenamento

• O jogo é armazenado em -20℃. Armazene o produto em um refrigerador da temperatura constante em -20℃ imediatamente depois do recibo. Se as condições de armazenamento são apropriadas, o produto não degradará nenhum desempenho durante o período de uma validez de 1 ano.
• o componente da mistura-SYBR de 2×RT-qPCR EasyTM contém o verde I de SYBR, mantém-no por favor longe da luz.

Informação componente do jogo

Mistura-SYBR de 2× RT-qPCR EasyTM: Reverso Transcriptase de Foregene, inibidor do RNase, polimerase de ADN de Foregene HotStar Taq, relação aperfeiçoada dos dNTPs, SYBR GreenI, Mg2+, estabilizadores, realçadores, e optimizers.

Tintura da referência de ROX: é usada geralmente em amplificadores do PCR do tempo real das empresas tais como ABI e Stratagene para ajustar a diferença entre os tubos do PCR e os tubos causados por erros de carga da amostra do PCR. A concentração de tintura da referência de ROX exigida por instrumentos diferentes é diferente, e o usuário pode adicioná-la de acordo com a concentração recomendada do instrumento.

Precauções: (Leia por favor as precauções com cuidado antes de usar o jogo)

Os reagentes devem evitar a congelação repetida e thawing, se não o desempenho dos reagentes diminuirá ou tornar-se-á inválido.

Os reagentes no jogo devem ser protegidos da luz e ser armazenados em -20°C.

Recomenda-se usar a extração da amostra ou o RNA fresco do molde armazenada em -80°C (o RNA deve evitar a congelação repetida e thawing).

A fim evitar a contaminação do RNase, execute por favor a experiência no espaço RNase-livre; as pontas da pipeta e os tubos do PCR usados devem ser RNase-livres; e vista luvas descartáveis e máscaras.

Este jogo deve ser usado com primeiras demão específicas para experiências. Selecione por favor as primeiras demão específicas para que o gene seja amplificado de acordo com as necessidades da experiência.

Antes de usar, mistura-SYBR posta I de 2×RT-qPCR EasyTM no gelo completamente ao derretimento, súbito e mistura bem antes de usar; a preparação do sistema deve ser operada em um banho de gelo para melhorar o desempenho do jogo e para aumentar a amplificação do PCR a especificidade.

a mistura-SYBR de 2×RT-qPCR EasyTM contém o verde I de SYBR, evita por favor a luz forte.

Concentração do RNA do molde

RT-qPCR EasyTM (uma etapa) - verde I de SYBR: (sistema)/20μl do RNA do total 0.1pg-100ng.

Guia da operação

: Preparação dos materiais e dos reagentes

1. Prepare o molde preparado do RNA (se recomenda usar jogos da série do jogo do isolamento do RNA do total de Foregene para extrair e refinar o RNA), as primeiras demão específicas (10μM) e materiais de consumo e instrumentos relacionados.

Nota: Assegure por favor a integridade do RNA e tente-a usar o RNA extraído das amostras frescas.

2. Mistura-SYBR posta de 2×RT-qPCR EasyTM, tintura RNase-livre da referência ddH2O, e 50×ROX (caso necessário) no gelo para deixá-la derreter naturalmente, e passar rapidamente a parede do tubo para misturar até o uso.

B: Preparação do sistema RT-qPCR

A mistura-SYBR de 2× RT-qPCR EasyTM é conveniente e rápida de usar-se, e evita a poluição durante a operação e os erros experimentais causados por preparações múltiplas do sistema de reação na maior medida do possível. Ao usar-se, somente a metade do volume do sistema de reação (por exemplo, se o sistema de reação é 20μl, solução da mistura-SYBR da tomada 10μl 2×RT-qPCR EasyTM), adiciona o molde do RNA e primeiras demão específicas, e adiciona ddH2O RNase-livre para compor o volume. Consulte para apresentar abaixo 1 para a preparação específica do sistema de reação RT-qPCR

Formulário 1: Preparação do sistema RT-qPCR

1*: Geralmente a concentração final de primeira demão é 0.2-0.25μM para obter melhores resultados. Quando o desempenho da reação é pobre, a concentração da primeira demão pode ser ajustada dentro da escala de 0.1-0.5μM.

Nota: A primeira demão dianteira e a primeira demão reversa são primeiras demão específicas para o gene do alvo.

2*: Escolha a concentração final apropriada de tintura da referência de ROX de acordo com instrumentos quantitativos diferentes do PCR. A concentração ótima de tintura da referência de ROX para máquinas quantitativas comuns do PCR é mostrada na seguinte tabela:

C: Ajuste do sistema de reação RT-qPCR

• Após ter preparado o sistema RT-qPCR com referência à tabela acima, mistura delicadamente (você pode usar uma ponta da pipeta delicadamente à pipeta; você pode igualmente misturar em um vortexer e em um centrifugador momentaneamente para recolher o líquido dispersado na parede do tubo ou no tampão do tubo, e em um lugar na caixa de gelo para uso posterior).

2. Refira os ajustes do programa da reação RT-qPCR (tabela 2) para ajustar a temperatura e o tempo da reação.

Nota: A fim assegurar a atividade da mistura-SYBR de 2×RT-qPCR EasyTM e melhorar sua eficiência da amplificação, é o melhor preparar o sistema de reação RT-qPCR após ter estabelecido o programa do instrumento do PCR, de modo que o programa da reação possa ser incorporado imediatamente depois que a preparação do sistema é terminada.

3. A fim obter o melhor efeito do qPCR, o PCR do inclinação pode ser usado para aperfeiçoar as condições da reação para moldes diferentes e primeiras demão diferentes.

Nota: A variação da temperatura da extensão da polimerase de ADN de Foregene Hotstar Taq forneceu neste jogo é: 60-72℃, e a melhor temperatura da extensão são 72℃.

O seguinte é um exemplo de condições da reação RT-qPCR. Recomenda-se usar um método do pas-de-deux para a reação do PCR. Quando a concentração do molde é demasiado baixa causar a amplificação não específica, o baixo valor do TM da primeira demão conduz à baixa eficiência da amplificação ou repetibilidade pobre da curva da amplificação, etc., recomenda-se tentar o método da três-etapa para a reação do PCR. Consulte para apresentar 2-1 (método do pas-de-deux) e tabela 2-2 (método da três-etapa) para o ajuste de condições da reação RT-qPCR.

Formulário 2-1: Ajuste do programa da reação RT-qPCR (pas-de-deux)

Formulário 2-2: Ajuste do programa da reação RT-qPCR (etapa três)

1*: O tempo reverso da transcrição pode ser ajustado de acordo com necessidades experimentais. Os genes endógenos gerais tais como o β-actínio precisam somente 10 minutos; para detectar genes expressados específicos, o tempo reverso da transcrição pode ser apropriadamente prolongado como necessário.

2*: Ajuste uma estadia específica de acordo com o comprimento do fragmento amplificado do alvo. A velocidade da amplificação da polimerase de ADN de Foregene HotStar Taq é 2kb/min.

Nota: As condições da reação do PCR variam segundo as condições estruturais do molde, das primeiras demão, etc. Para moldes do RNA com estruturas secundárias complexas, recomenda-se usar 42℃ para a primeira etapa da transcrição reversa. Na operação específica, é necessário projetar as condições ótimas da reação de acordo com as condições específicas tais como o tamanho do fragmento do alvo, a sequência baixa do fragmento amplificado e o índice do GC e o comprimento da primeira demão, incluindo a temperatura, o tempo da extensão, etc. de recozimento.

Diagrama da operação

Precauções: (Leia por favor as precauções com cuidado antes de usar o jogo)

- Os reagentes devem evitar a congelação repetida e thawing, se não o desempenho dos reagentes diminuirá ou tornar-se-á inválido.

- Os reagentes no jogo devem ser protegidos da luz e ser armazenados em -20°C.

- Recomenda-se usar a extração da amostra ou o RNA fresco do molde armazenada em -80°C (o RNA deve evitar a congelação repetida e thawing).

- A fim evitar a contaminação do RNase, execute por favor a experiência no espaço RNase-livre; as pontas da pipeta e os tubos do PCR usados devem ser RNase-livres; e vista luvas descartáveis e máscaras.

- Este jogo deve ser usado com primeiras demão específicas para experiências. Selecione por favor as primeiras demão específicas para que o gene seja amplificado de acordo com as necessidades da experiência.

- Antes de usar, mistura-SYBR posta I de 2×RT-qPCR EasyTM no gelo completamente ao derretimento, súbito e mistura bem antes de usar; a preparação do sistema deve ser operada em um banho de gelo para melhorar o desempenho do jogo e para aumentar a amplificação do PCR a especificidade.

- a mistura-SYBR de 2×RT-qPCR EasyTM contém o verde I de SYBR, evita por favor a luz forte.