Pas-de-deux Cat.No.RT de RT-PCR EasyTM II - jogos mestres de 02021/02022 de PCR da mistura do PCR do RT do pas-de-deux

RT-PCR EasyTM II (pas-de-deux) Cat.No.RT - jogos mestres de 02021/02022 de PCR da mistura do pas-de-deux RT-PCR

RT-PCR EasyTM II (pas-de-deux)

Cat.No.RT - 02021/02022

Mistura mestra do pas-de-deux RT-PCR

RT-PCR EasyTM II (pas-de-deux)

Cat.No.RT - 02021/02022

Mistura mestra do pas-de-deux RT-PCR

Para o uso da pesquisa somente

Loja em -20℃

Introdução de produto

RT-PCR EasyTM II (pas-de-deux) contém todos os reagentes para o pas-de-deux RT-PCR, combinando a reação do RT e a reação do PCR no mesmo jogo, fornecendo a mistura aperfeiçoada do RT e a mistura do PCR. A mistura original do RT pode sintetizar o cDNA de alta qualidade da primeiro-costa facilmente e eficientemente. 2× o sinal de adição da mistura do PCR EasyTM tem a amplificação de grande eficacia e específica. A combinação orgânica dos dois faz a detecção do gene do alvo mais sensível.

Características

A análise quantitativa do tempo real do RNA pode ser realizada rapidamente e exatamente.

O jogo usa uma polimerase original do reagente da transcrição do reverso de Foregene e de ADN de Foregene HotStar Taq combinada com um sistema de reação original para melhorar eficazmente a eficiência da amplificação e a especificidade da reação.

O sistema de reação aperfeiçoado faz a reação tem uma sensibilidade mais alta da detecção, uma estabilidade térmica mais forte, e a melhor tolerância.

Kit Contents

Condições do transporte e de armazenamento

1. Condições do transporte

O processo inteiro de transporte de baixa temperatura da caixa de gelo, para assegurar-se de que o jogo esteja em um estado de <4>

2. Condições de armazenamento

Armazenado em -20°C. armazene o produto em um refrigerador da temperatura constante em -20°C imediatamente depois do recibo. Se as condições de armazenamento são apropriadas, o produto não degradará nenhum desempenho durante o período de uma validez de 1 ano.

Informação componente do jogo

Mistura de 2× RT EasyTM: Reverso Transcriptase de Foregene, inibidor do RNase, dNTPs, amortecedor da reação, optimizer e estabilizador, etc.

2× sinal de adição da mistura do PCR EasyTM: Polimerase de ADN de Foregene Taq, dNTPs, Mg2+, amortecedor da reação, optimizer e estabilizador.

Precauções: (Leia por favor as precauções com cuidado antes de usar o jogo)

Os reagentes devem evitar a congelação repetida e thawing, se não o desempenho dos reagentes diminuirá ou tornar-se-á inválido.

Para moldes, recomenda-se usar o RNA extraído das amostras frescas ou armazenado em -80℃ (o RNA deve evitar a congelação repetida e thawing).

A fim evitar a contaminação do RNase, a operação da experiência deve ser realizada no espaço RNase-livre; as pontas da pipeta e de centrifugador do PCR os tubos usados devem ser RNase-livres; e as luvas descartáveis e as máscaras devem ser vestidas.

Este jogo deve ser usado com primeiras demão específicas para experiências. Selecione por favor as primeiras demão específicas para que o gene seja amplificado de acordo com as necessidades da experiência.

Antes de usar, mistura posta de 2×RT EasyTM e de mistura de 2×PCR EasyTM sinal de adição no gelo completamente ao derretimento, ao súbito e à mistura bem antes de usar; a preparação do sistema deve ser operada em um banho de gelo para melhorar o desempenho do jogo e para melhorar a especificidade da amplificação do PCR.

Precauções: (Leia por favor as precauções com cuidado antes de usar o jogo)

- Os reagentes devem evitar a congelação repetida e thawing, se não o desempenho dos reagentes diminuirá ou tornar-se-á inválido.

- Para moldes, recomenda-se usar o RNA extraído das amostras frescas ou armazenado em -80℃ (o RNA deve evitar a congelação repetida e thawing).

- A fim evitar a contaminação do RNase, a operação da experiência deve ser realizada no espaço RNase-livre; as pontas da pipeta e de centrifugador do PCR os tubos usados devem ser RNase-livres; e as luvas descartáveis e as máscaras devem ser vestidas.

- Este jogo deve ser usado com primeiras demão específicas para experiências. Selecione por favor as primeiras demão específicas para que o gene seja amplificado de acordo com as necessidades da experiência.

- Antes de usar, mistura posta de 2×RT EasyTM e de mistura de 2×PCR EasyTM sinal de adição no gelo completamente ao derretimento, ao súbito e à mistura bem antes de usar; a preparação do sistema deve ser operada em um banho de gelo para melhorar o desempenho do jogo e para melhorar a especificidade da amplificação do PCR.

Concentração do RNA do molde

RT-PCR EasyTM II (pas-de-deux): (sistema)/20μl do RNA do total 0.1pg-5μg

Guia da operação

A-1: Preparação dos materiais e dos reagentes

1. Prepare o molde preparado do RNA (se recomenda usar jogos da série do jogo do isolamento do RNA do total de Foregene para extrair e refinar o RNA), as primeiras demão específicas (10μM) e materiais de consumo e instrumentos relacionados.

Nota: Assegure por favor a integridade do RNA e tente-a usar o RNA extraído das amostras frescas.

2. A mistura posta de 2×RT EasyTM e ddH2O RNase-livres em um banho de gelo para deixá-lo derreter naturalmente, e passam rapidamente a parede do tubo para misturar bem para uso posterior.

A-2: Preparação do sistema do RT

A mistura de 2× RT EasyTM é conveniente e rápida de usar-se, evitando a poluição durante a operação e os erros experimentais causados por preparações múltiplas do sistema de reação na maior medida do possível. Ao usar-se, apenas tome a metade do volume do sistema de reação (por exemplo, se o sistema de reação é 20μl, solução da mistura da tomada 10μl 2×RT EasyTM), adicione o molde do RNA e primeiras demão reversas da transcrição, e adicione ddH2O RNase-livre para compor o volume a 20μl. A preparação específica do sistema de reação do RT pode consultar para apresentar abaixo 1.

Formulário 1: Preparação do sistema do RT

A-3: Ajuste do programa da reação do RT

1. Após ter preparado o sistema do RT com referência à tabela acima, mistura delicadamente (você pode usar uma ponta da pipeta para fundir delicadamente; você pode igualmente misturá-la no vortexer e centrifugá-la para recolher o líquido dispersado na parede do tubo ou no tampão do tubo, e coloca-o em pronto para uso na caixa de gelo).

2. Refira os ajustes do programa da reação do RT (tabela 2) para ajustar a temperatura da reação, a hora, etc.

Nota: A fim assegurar a atividade da mistura e melhorar sua eficiência da amplificação, é o melhor preparar o sistema de reação do RT após o banho do metal alcança a temperatura ajustada da reação (temperatura reversa 42℃ ou 50℃ da transcrição), de modo que o sistema possa ser preparado imediatamente depois da conclusão da preparação do sistema. Incorpore o programa da reação. A reação do RT pode igualmente ser executada em uma máquina do PCR.

Formulário 2: Ajuste do programa da reação do RT

Nota: Ao usar a primeira demão aleatória, a reação deve ser pré-aquecida em 25℃ para 10min antes da primeira etapa da reação. O procedimento acima é para a referência somente. As condições reais da reação variam segundo as condições estruturais do molde, das primeiras demão, etc. Para moldes do RNA com resultados secundários complexos, a primeira temperatura da reação é recomendada ser 50℃.

1. O produto da reação pode diretamente ser usado em testes subsequentes, ou ser armazenado em -20°C por até uma semana. Para o armazenamento a longo prazo, recomenda-se evitar a congelação repetida e thawing em -80°C.

B: Reação da identificação do PCR

B-1: Preparação do sistema de reação do PCR

Use o cDNA sintetizou na etapa A como um molde, e executam a reação do PCR com o sinal de adição da mistura de 2×PCR EasyTM fornecido no jogo. Sinal de adição da mistura do lugar 2×PCR EasyTM, cDNA, e ddH2O RNase-livre em um banho de gelo para deixá-lo derreter naturalmente, e passar rapidamente a parede do tubo para misturar até o uso. Para a preparação específica do sistema do PCR, consulte para apresentar abaixo 3.

Formulário 3: 反应体系配制 da preparação do sistema de reação do PCR

1*: Geralmente a concentração final de primeira demão é 0.2-0.25μM para obter melhores resultados. Quando o desempenho da reação é pobre, a concentração da primeira demão pode ser ajustada dentro da escala de 0.1-0.5μM.

B-2: Ajuste da condição da reação do PCR

1. Após ter preparado o sistema do PCR com referência à tabela acima, mistura delicadamente (você pode usar uma ponta da pipeta para fundir delicadamente; você pode igualmente misturá-la no vortexer e centrifugá-la para recolher o líquido dispersado na parede do tubo ou no tampão do tubo, e coloca-o em pronto para uso na caixa de gelo).

2. Refira os ajustes do programa da reação do PCR (tabela 4) para ajustar a temperatura e o tempo da reação.

Nota: A fim assegurar a atividade da mistura do PCR e melhorar sua eficiência da amplificação, é o melhor ajustar as condições do PCR na máquina do PCR antes de preparar o sistema do PCR.

Formulário 4: Ajuste da condição da reação do PCR

1*: Ajuste uma estadia específica de acordo com o comprimento do fragmento amplificado do alvo. A velocidade da amplificação da polimerase de ADN de Foregene Taq é 2kb/min.

Nota: As condições da reação do PCR variam segundo as condições estruturais do molde, das primeiras demão, etc. Para moldes do RNA com estruturas secundárias complexas, recomenda-se que a temperatura da reação para a primeira etapa da transcrição reversa é 50°C. Em operações específicas, é necessário projetar as condições ótimas da reação, incluindo a temperatura, tempo da extensão, etc. de recozimento, de acordo com condições específicas tais como o tamanho do fragmento do alvo, a sequência baixa do fragmento amplificado, e o índice do GC e o comprimento da primeira demão.

Diagrama da operação de RT-PCR