Jogos mestres RT-PCR EasyTM I da mistura da etapa RT-PCR de FOREGENE um para a reação de QPCR

Jogos mestres de uma etapa RT-PCR EasyTM I da mistura de FOREGENE RT-PCR (uma etapa) para a reação do qPCR

RT-PCR EasyTM I (uma etapa)

Cat.No.RT - 02011/02012

Mistura mestra de uma etapa de RT-PCR

Para o uso da pesquisa somente

Loja em -20℃

Introdução de produto

Os produtos de uma etapa da série de Foregene RT-PCR EasyTM realizam que a reação integrada do RNA ao ADN dobro-encalhado, isto é, inverte a transcrição e amplificação do PCR está terminado no mesmo tubo de centrifugador da reação e o mesmo sistema de reação, que simplifica as etapas experimentais, aperfeiçoa o programa experimental, e melhora a eficiência da experiência.

RT-PCR EasyTM I (uma etapa) é um jogo de uma etapa de RT-PCR desenvolvido especialmente por Foregene, que realiza a operação contínua do RT ao PCR no mesmo tubo. A operação é simples e rápida, que pode eficazmente reduzir a poluição durante a experiência. A mistura de 2×RT-PCR EasyTM tem a tolerância forte, a estabilidade térmica, a eficiência elevada e a especificidade para a amplificação.

Características

O jogo de uma etapa permite a transcrição reversa e o PCR a ser realizados no mesmo tubo. Precisa somente de adicionar o RNA do molde, primeiras demão específicas do PCR e ddH2O RNase-livre.

A análise quantitativa do tempo real do RNA pode ser realizada rapidamente e exatamente.

O jogo usa uma polimerase original do reagente da transcrição do reverso de Foregene e de ADN de Foregene HotStar Taq combinada com um sistema de reação original para melhorar eficazmente a eficiência da amplificação e a especificidade da reação.

O sistema de reação aperfeiçoado faz a reação tem uma sensibilidade mais alta da detecção, uma estabilidade térmica mais forte, e a melhor tolerância.

Kit Contents

Condições do transporte e de armazenamento

condições 1.Transportation

O processo inteiro de transporte de baixa temperatura da caixa de gelo, para assegurar-se de que o jogo esteja em um estado de <4>

2. Condições de armazenamento

RT EasyTM eu sou armazenado em -20°C. armazeno o produto em um refrigerador da temperatura constante em -20°C imediatamente depois do recibo. Se as condições de armazenamento são apropriadas, o produto não degradará nenhum desempenho durante o período de uma validez de 1 ano.

Informação componente do jogo

Mistura de 2× RT-PCR EasyTM: Reverso Transcriptase de Foregene, polimerase de ADN do inibidor do RNase, do Foregene HotStar Taq, dNTPs, Mg2+, amortecedor da reação, optimizer e estabilizador, etc.

Precauções: (Leia por favor as precauções com cuidado antes de usar o jogo)

Para moldes, recomenda-se usar o RNA extraído das amostras frescas ou armazenado em -80℃ (o RNA deve evitar a congelação repetida e thawing).

A fim evitar a contaminação do RNase, a operação da experiência deve ser realizada no espaço RNase-livre; as pontas da pipeta e de centrifugador do PCR os tubos usados devem ser RNase-livres; e as luvas descartáveis e as máscaras devem ser vestidas. Antes de usar, põe a mistura de 2×RT-PCR EasyTM sobre o gelo completamente ao derretimento, ao súbito e à mistura bem antes de usar; a preparação do sistema deve ser operada em um banho de gelo para melhorar o desempenho do jogo e a especificidade da amplificação do PCR.

Concentração do RNA do molde

RT-PCR EasyTM I (uma etapa): (sistema)/20μl do RNA do total 0.1pg-1μg

Guia da operação

: Preparação dos materiais e dos reagentes

1. Prepare o molde preparado do RNA (se recomenda usar jogos da série do jogo do isolamento do RNA do total de Foregene para extrair e refinar o RNA), as primeiras demão específicas (10μM) e materiais de consumo e instrumentos relacionados.

Nota: Assegure por favor a integridade do RNA e tente-a usar o RNA extraído das amostras frescas.

2. A mistura do lugar 2× RT-PCR EasyTM e ddH2O RNase-livres em um banho de gelo para deixá-lo derreter naturalmente, e passam rapidamente a parede do tubo para misturar bem para uso posterior.

B: Preparação do sistema de RT-PCR

A mistura de 2×RT-PCR EasyTM é conveniente e rápida de usar-se, evitando a poluição durante a operação e os erros experimentais causados por preparações múltiplas do sistema de reação na maior medida do possível. Ao usar-se, somente a metade do volume do sistema de reação (por exemplo, se o sistema de reação é 20μl, solução da mistura da tomada 10μl 2×RT-PCR EasyTM), adiciona uma quantidade apropriada de molde do RNA e de primeiras demão específicas, e adiciona ddH2O RNase-livre para compor o volume. Consulte para apresentar abaixo 1 para a preparação específica do sistema de reação de RT-PCR.

Formulário 1: Preparação do sistema de RT-PCR

1*: Geralmente a concentração final de primeira demão é 0.2-0.25μM para obter melhores resultados. Quando o desempenho da reação é pobre, a concentração da primeira demão pode ser ajustada dentro da escala de 0.1-0.5μM.

Nota: A primeira demão dianteira e a primeira demão reversa são as primeiras demão específicas para o gene do alvo; o sistema 50μl, refere por favor o sistema 20μl para ajustar proporcionalmente a dosagem do reagente.

C: Ajuste do programa da reação de RT-PCR

• Após ter preparado o sistema de RT-PCR com referência à tabela acima, mistura delicadamente (você pode usar a ponta da pipeta para fundir delicadamente; você pode igualmente misturar em um vortexer e em um centrifugador momentaneamente para recolher o líquido dispersado na parede do tubo ou no tampão do tubo, e em um lugar na caixa de gelo para uso posterior).

2. Refira os ajustes do programa da reação de RT-PCR (tabela 2) para ajustar a temperatura e o tempo da reação.

Nota: A fim assegurar a atividade da mistura de 2×RT-PCR EasyTM e melhorar sua eficiência da amplificação, é o melhor preparar o sistema de reação de RT-PCR após ter ajustado o programa do instrumento do PCR, de modo que o programa da reação possa ser incorporado imediatamente depois que o sistema é preparado.

Formulário 2: Ajuste do sistema de reação de RT-PCR

Nota: O procedimento acima é para a referência somente. As condições reais da reação variam segundo as condições estruturais do molde, das primeiras demão, etc. Para moldes do RNA com estruturas secundárias complexas, a temperatura da reação para a primeira etapa da transcrição reversa é recomendada ser 50°C. Na operação específica, é necessário projetar as condições ótimas da reação, incluindo a temperatura de recozimento, o tempo da extensão, etc. de acordo com as condições específicas do tamanho do fragmento do alvo, a sequência baixa do fragmento amplificado, e o índice do GC e o comprimento da primeira demão.
Diagrama da operação de RT-PCR