COMO MELHORAR A EFICIÊNCIA DA TRANSCRIÇÃO DO REVERSO DE LNCRNA?

Ligação

O RNA longo da não-codificação, lncRNA é um RNA da não-codificação com maiores de 200 nucleotides de um comprimento, geralmente entre NT 200-100000. o lncRNA regula a expressão genética em epigenético, transcrição e níveis cargo-transcricionais, e participa X no cromossoma que silencia, genoma que imprime e a alteração da cromatina, a ativação da transcrição, a interferência da transcrição, o transporte nuclear, o regulamento do ciclo de pilha, o regulamento da diferenciação de pilha, e os efeitos da compensação da dose (efeito da compensação da dosagem) e muitos outros processos regulamentares importantes são estreitamente relacionados à ocorrência, ao desenvolvimento e à prevenção de doenças humanas, e são atualmente um dos hot spot no campo da biomedicina.

01 tipos e características de LncRNA

o lncRNA é dividido em muitos tipos de acordo com as fontes diferentes de sua formação, segundo as indicações da figura acima. Tem as seguintes características:

1. os lncRNAs são geralmente mais longos, com expressão dinâmica e métodos de emenda diferentes durante a diferenciação
2. comparado com a codificação de genes, o lncRNA tem geralmente um nível mais baixo da expressão
3. A maioria de lncRNAs têm a especificidade temporal e espacial óbvia da expressão em processo da diferenciação e do desenvolvimento do tecido
4. Há umas expressões características nos tumores e nas outras doenças
5. Os lugar subcelulares do lncRNA são diversos
6. A sequência é baixa na conservação, mas a função tem um determinado grau de conservação, etc.

02 perguntas frequentemente feitas sobre a transcrição do reverso de LncRNA

Devido ao baixo índice do lncRNA nas pilhas, comprimento longo e estrutura de nível elevado, tal RNA tem frequentemente estruturas complexas tais como laços ou gancho de cabelo da haste, e o RT-qPCR é problemas inclinados da transcrição reversa mal sucedida ou da baixa eficiência.

Solução da transcrição do reverso de 03 LncRNA

Na regra central, o processo de vírus do RNA usando seu próprio transcriptase reverso para sintetizar o ADN que usa o RNA como um molde é chamado transcrição reversa. O processo de usar o transcriptase reverso do vírus do RNA para sintetizar o molde do cDNA é chamado in vitro transcrição reversa. Os elementos principais incluíram no sistema reverso da transcrição: Molde do RNA, transcriptase reverso, primeiras demão e outros componentes.

Molde 1.RNA

A influência do molde do RNA na transcrição reversa é refletida em suas estrutura, pureza e integridade. Mais altas a pureza e a integridade do RNA extraído, do mais alta a eficiência da transcrição reversa e do mais exata os resultados quantitativos subsequentes. O RNA refinado por reagentes de uso geral da extração do RNA contém frequentemente resíduos dos sais do álcool e do guanidine, que têm um efeito inibitório forte na maioria de transcriptase reverso.

transcriptase 2.Reverse

O transcriptase reverso tem uma influência chave no sistema reverso inteiro da transcrição. A temperatura apropriada para o transcriptase reverso usado na maioria de laboratórios é geralmente 42°C. de fato, a abertura da estrutura de nível elevado do RNA exige uma temperatura mais alta, e as exigências para o transcriptase reverso são mais altas.

3.Primer

As primeiras demão reversas da transcrição incluem primeiras demão gene-específicas, primeiras demão aleatórias e primeiras demão oligo do descolamento. A maioria de lncRNAs não contêm as caudas de polyA, e é importante combinar corretamente as primeiras demão aleatórias com o descolamento oligo.

componentes 4.Other

Tendo em conta que o RNA é particularmente fácil de degradar, a introdução de componentes no sistema reverso da transcrição pode ser minimizada, que pode eficazmente impedir a entrada do RNase e assegurar o progresso liso da transcrição reversa.

Foregene obtém do molde do RNA, transcrição reversa ao qPCR acompanha detalhadamente sua detecção do lncRNA

Jogo total animal do isolamento do RNA (com a coluna da remoção do gDNA)

Jogo total do isolamento do RNA da pilha (com a coluna da remoção do gDNA)

Lnc-RT HeroTM mim (com gDNase) (Premix super para a síntese do cDNA da primeiro-costa do lncRNA)

Verde I do PCR EasyTM-SYBR do tempo real

Vantagens da extração do RNA:

O jogo usa a tecnologia de terceira geração da extração do RNA, nenhuma necessidade de usar o DNase.

11 minutos da placa 96, 24, 12, e 6 boa cultivaram as pilhas, extração de grande eficacia de gDNA-livre, alto-pureza, RNA total de alta qualidade da pilha.

Vantagens da transcrição reversa do lncRNA:

Um sistema reverso da transcrição desenvolvido especialmente para que LncRNA remova rapidamente a contaminação genomic do ADN.

O sistema reverso da transcrição tem a estabilidade térmica alta e ainda tem o bom desempenho reverso da transcrição em 50°C.

Os moldes com índice alto do GC e estrutura secundária complexa podem ser invertidos com eficiência elevada.

Vantagens do qPCR:

A polimerase de Foregene Taq do começo quente tem uma eficiência mais alta da amplificação, uma sensibilidade mais alta da amplificação, e uma especificidade mais alta da amplificação.

A mistura fácil real aperfeiçoada do PCR faz o verde que de SYBR eu tenho uma sensibilidade mais alta da detecção, e sua intensidade da fluorescência é 3-5 vezes que dos produtos similares, que podem encontrar as necessidades de tipos diferentes de experiências quantitativas da fluorescência.