Como escolher uma polimerase do quente-início Taq/DNA

a enzima de Taq do Quente-início é amplamente utilizada. Comparado com a polimerase de ADN ordinária, a enzima de Taq do quente-início pode eficazmente evitar alguma amplificação não específica e a formação de dímero da primeira demão, e pode eficazmente melhorar a taxa de êxito de amplificação do gene do alvo. Especialmente no campo de testes genéticos, a enzima de Taq do quente-início foi identificada como um padrão imperativo na indústria, e a polimerase de ADN ordinária não deve ser usada. Tão pode ser visto do acima, enzimas de Taq do quente-início são amplamente utilizado. Presentemente, há muitos tipos de enzimas de Taq do quente-início no mercado interno, mas não há muitas enzimas de Taq do quente-início com de alta qualidade. Enfrentado com tão muitos produtos da enzima de Taq do quente-início, como devemos nós escolher?

1. Selecione a enzima de Taq do quente-início com eficiência alta da amplificação

A eficiência da amplificação do PCR é estreitamente relacionada ao desempenho da enzima de Taq. Após a boa enzima de Taq um sistema de reação é aperfeiçoado, a eficiência da amplificação está acima de 95%, e a escala da amplificação da quantidade inicial do molde é larga. A amplificação satisfatória pode ser obtida quando o índice do gene do alvo é baixo, e não é fácil ser envenenado quando a quantidade do molde é alta, e o período exponencial da amplificação é longo. Para a enzima de Taq com mau desempenho, mesmo se o sistema de reação foi aperfeiçoado por muitas vezes, a eficiência da amplificação é ainda menos de 90%, a forma de “S” da curva da amplificação não é óbvia, a inclinação é pequena, e a curva é lisa. Quando a quantidade de molde é baixa, não pode ser amplificada, e quando a quantidade de molde é alta, o efeito da amplificação não é ideal. Consequentemente, a seleção de polimerases de ADN com eficiência alta da amplificação é crucial ao sucesso do PCR e do qPCR.

2. Enzima seleta de Taq do quente-início com poder forte da enzima

O poder enzimático da enzima de Taq é relacionado à eficiência da amplificação. Geralmente, mais forte o poder enzimático da enzima de Taq do quente-início, mais longo o período do crescimento exponencial de amplificação do PCR, mais típica a curva ‘S-dada forma’, mais alto o valor do sinal da fluorescência, e o mais apropriado para a detecção multiplex do PCR. As polimerases de ADN do tipo com poder enzimático fraco podem geralmente somente apoiar 2 reações do plex. Ao fazer 3 reações do plex, a curva da amplificação é baixa, o valor do sinal da fluorescência é baixo, e não há nenhuma curva típica da amplificação, assim que os resultados são difíceis de julgar.

3. Selecione uma enzima de Taq do quente-início com sensibilidade alta

Em linhas gerais, a polimerase de ADN tem a eficiência alta da amplificação e a sensibilidade alta, mas há igualmente umas inconsistências. Se a abundância do gene do alvo da amostra a ser amplificada é baixa, recomenda-se testar a sensibilidade da amplificação da enzima de Taq. O método de detecção o mais comum é realizar-se 10 vezes ou diluição do inclinação de 5 dobras do fragmento do plasmídeo do gene do alvo, realiza a detecção do PCR na diluição mais baixa, e seleciona a enzima de Taq do quente-início com sensibilidade mais alta da detecção.

Pode-se ver do acima que os pesquisadores precisam de escolher de acordo com suas próprias exigências experimentais e circunstâncias de financiamento. É o melhor fazer uma experiência da amplificação da diluição do inclinação para detectar a eficiência da amplificação e a sensibilidade da enzima de Taq do quente-início.

Um exemplo da polimerase de ADN do Taq de Foregene:

Polimerase de ADN de Foreasy HS Taq

Descrição

A polimerase de ADN de Foreasy HS Taq é uma polimerase de ADN expressou em Escherichia Coli que projeta as bactérias pela tecnologia da recombinação do gene. A enzima é combinada com um buffffer original da reação, que faça o produto altamente resistente e compatível, e pode diretamente usar o lysate da amostra (sistema do Lysis de Foregene) como um molde para reações da detecção.

Aplicação

PCR qualitativo e detecção quantitativa do PCR de moldes purifified e de moldes non-purifified.

Controle da qualidade

1. Nenhuma atividade exógena da nuclease detectou

Método 2.PCR para detectar o ADN genomic residual sem anfitrião

3.It pode effffectively amplificar genes da único-cópia no genoma humano

4.Store na temperatura ambiente por uma semana, mudanças noobvious da atividade